常溫細胞收貨當天處理方式
1.收到常溫細胞后,及時拍照記錄有無漏液瓶身破損現象。
2.鏡下觀察有無微生物污染現象拍照記錄不同倍數鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現象,方便后續(xù)售后處理。
3.消毒后,更換贈送的完全培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2.3小時。如細胞有多數懸浮細胞需要高心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。
4.觀察細胞密度若超過80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代。請根據實際情況決定),初次傳代推薦比例1:2到:(按實際收貨細
胞密度決定,若不確定可聯系技術支持)若細胞密度不到80%則可繼續(xù)培養(yǎng),注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基
以收集細胞。
5.由于氣溫運輸等影響造成貼壁細胞漂浮的.請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代,或及時聯系技術支持進行指導傳代。
6.該細胞對培養(yǎng)基及血清的質量要求較高,其中任何-一個質量不好都會導致后續(xù)培養(yǎng)過程中細胞的分化,特別是傳3、4代以后細胞容易出
現分化,細胞變大貼壁較緊呈典型”攤雞蛋”樣;
7.該細胞在傳代或復蘇后,剛貼壁時會有短小的突觸,但細胞胞體還是呈圓形或近圓形待細胞培養(yǎng)23天后,短小突觸會消失;
8.如果用胰酶消化經驗不足時,極易導致后續(xù)細胞形態(tài)的改變也不容易將細胞消化下來,
9.如果用細胞刮將細胞刮下來容易導致大量細胞死亡和細胞形態(tài)的改變也不容易分散為單細胞;
10該細胞不管在任何密度下腰是更換了新鮮培養(yǎng)基后緊接著進行吹打細胞會很難從培養(yǎng)瓶壁,上脫落。
推薦的傳代方法有以下兩種:
方法一該細胞在細胞密度較大.培養(yǎng)基較黃時,不要去除舊培養(yǎng)基用移液管直接對培養(yǎng)瓶壁上的細胞進行吹打使細胞從壁上脫落。細胞
脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶也可收集培養(yǎng)瓶中的細胞懸液,離心后,棄上清再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞后分瓶,進行
培養(yǎng)。這種方法容易出現的問題是如果操作者經驗不足可能導致部分細胞無法脫落。
方法二細胞密度達到80-90%,需要進行傳代時可在培養(yǎng)瓶中的原培養(yǎng)基中滴加1- 2滴無菌的HEPES緩沖液視培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的體積適
當可以增加HEPES*的用量)作用1-150min,使培養(yǎng)基PH變酸培養(yǎng)基顏色變黃,直接用移液管進行吹打這時細胞會很輕易脫落并成單細
胞。細胞脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶;也可收集培養(yǎng)瓶中的細胞懸液高心后,棄上清,再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞后
分瓶進行培養(yǎng)。
